Игнатенко Мария Андреевна — специалист отдела планирования и организации научных исследований.
ул. Саляма Адиля, д. 2, Москва, 123423
Maria A. Ignatenko.
Salyama Adilya st., 2, Moscow, 123423
Пономаренко Алексей Алексеевич — д.м.н., ведущий научный сотрудник отдела онкопроктологии, руководитель отдела планирования и организации научных исследований.
ул. Саляма Адиля, д. 2, Москва, 123423
Aleksey A. Ponomarenko.
Salyama Adilya st., 2, Moscow, 123423
Журина Марина Владимировна — к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории выживаемости микроорганизмов ФИЦ «Фундаментальные основы биотехнологии» РАН.
пр-т 60-летия Октября, д. 7, корп. 2, Москва, 117312
Marina V. Zhurina.
60 let Oktjabrja pr-t, 7, bld. 2, Moscow, 117312
Кострикина Надежда Афанасьевна — старший научный сотрудник подразделения ЦКП «Коллекция UNIQEM» ФИЦ «Фундаментальные основы биотехнологии» РАН.
пр-т 60-летия Октября, д. 7, корп. 2, Москва, 117312
Nadezhda A. Kostrikina.
60 let Oktjabrja pr-t, 7, bld. 2, Moscow, 117312
Жарков Евгений Евгеньевич — к.м.н., старший научный сотрудник отдела общей и реконструктивной колопроктологии.
ул. Саляма Адиля, д. 2, Москва, 123423
Evgeny E. Zharkov.
Salyama Adilya st., 2, Moscow, 123423
Николаев Юрий Александрович — д.б.н., ведущий научный сотрудник, заведующий лабораторией выживаемости микроорганизмов ФИЦ «Фундаментальные основы биотехнологии» РАН.
пр-т 60-летия Октября, д. 7, корп. 2, Москва, 117312
Yuri A. Nikolaev.
60 let Oktjabrja pr-t, 7, bld. 2, Moscow, 117312
Мелкумян Алина Рантиковна — к.м.н., руководитель отдела изучения микробиологических и иммунологических исследований.
ул. Саляма Адиля, д. 2, Москва, 123423
Alina R. Melkumyan.
Salyama Adilya st., 2, Moscow, 123423
ЦЕЛЬ: поиск биопленок и оценка бактериального состава хронической анальной трещины (ХАТ).
ПАЦИЕНТЫ И МЕТОДЫ: пациенту А., 40 лет, с диагнозом «хронические задняя и передняя анальные трещины со спазмом сфинктера» была проведена боковая подкожная сфинктеротомия с иссечением ХАТ. Перед операцией у пациента брались мазки из трещин для микробиологических исследований. Иссеченные операционные препараты ХАТ помещались в фиксирующие растворы. Микробиологические исследования, включающие в себя секвенирование генов 16S рРНК и MALDI-ToF масс-спектрометрию выделенных культур, проводились с целью оценки бактериального состава ХАТ. Микроскопические исследования, в которые входили сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) и просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ) применялись для поиска биопленочного расположения микроорганизмов. Выводы о наличии биопленок делали по результатам сравнения фотографий с достоверными их изображениями, описанными в литературе.
РЕЗУЛЬТАТЫ: в тканях, формирующих ХАТ, на основе секвенирования генов 16S рРНК выявлено большое разнообразие бактерий (56 родов); масс-спектрометрия мазков выявила лишь E. coli и P. anaerobius в значимой концентрации. С помощью СЭМ на одном из участков иссеченной ХАТ были обнаружены биопленки, содержащие бактериальные клетки (размером до 2 мкм), погруженные во внеклеточный матрикс; вне трещины подобных структур выявлено не было. При ПЭМ было идентифицировано скопление бактериальных клеток, окруженных внеклеточным полимерным матриксом, что было трактовано как биопленка из грамотрицательных бактерий. Через 7 месяцев у пациента сохранялась незаживающая послеоперационная рана в области ранее иссеченной задней трещины. При повторном посеве были получены E. coli и S. gallolyticus в значимых концентрациях. Иссечение рубцово-измененных краев раны и назначенное консервативное лечение позволили ране эпителизироваться в течение 3 недель.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: полученные результаты указывают на то, что микробные биопленки могут быть локализованы в ХАТ. Для достоверных выводов о биопленочной организации микроорганизмов в ХАТ и их влиянии на патологические и репаративные процессы необходимы дальнейшие исследования.
AIM: to reveal biofilms in chronic anal fissure (CAF) bacterial composition.
PATIENTS AND METHODS: patient A., 40 years old, with chronic posterior and anterior anal fissures with sphincter spasm underwent a lateral subcutaneous sphincterotomy with excision of the CAFs. Before the operation swabs were taken from fissures for microbiology. Removed specimens were placed in fixing solutions. Microbiological studies including 16S rRNA gene sequencing and MALDI-ToF mass spectrometry of isolated cultures were carried out to assess the bacterial composition of CAFs. Microscopic studies which included scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM) were used to search for the biofilm location of microorganisms. Conclusions about the presence of biofilms were made during the comparison of photographs with reliable images described in the literature.
RESULTS: a wide variety of bacteria (56 genera) was detected in the tissues forming the CAF based on sequencing of 16S rRNA genes; swab's mass spectrometry revealed only E. coli and P. anaerobius in significant concentrations. Using SEM on one of the sections of the excised CAF were found biofilms containing bacterial cells immersed in an extracellular matrix (which size was within the limits of 2 microns); similar structures weren't detected outside the CAF. On TEM an accumulation of bacterial cells, surrounded by an extracellular polymer matrix, what was interpreted as a biofilm of gram-negative bacteria, was identified. After 7 months, the patient retained a non-healing postoperative wound in the area of the previously excised posterior fissure. After repeated sowing, E. coli and S. gallolyticus were obtained in significant concentrations. Excision of the scarred edges of the wound and the prescribed conservative treatment allowed the wound to epithelize within 3 weeks.
CONCLUSION: the results show that microbial biofilms can be localized in the CAF. Further researches are needed for reliable conclusions about biofilm organization in CAF and their effect on pathological and reparative processes.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.